国产婷婷综合在线视频中文,国产三级三级三级精品,99国产精品久久一区二区三区,国产精品国产精品国产专

熱門搜索:鱟試劑,內(nèi)毒素檢測儀,內(nèi)毒素檢測試劑盒,基因重組鱟試劑,濁度法鱟試劑,顯色法鱟試劑,凝膠法鱟試劑,葡聚糖緩沖液,無熱原水,鱟試劑耗材
技術(shù)文章 / article 您的位置:網(wǎng)站首頁 > 技術(shù)文章 > 細(xì)菌內(nèi)毒素(脂多糖)的提取之PCP法、高壓超聲處理法及DMSO法的介紹

細(xì)菌內(nèi)毒素(脂多糖)的提取之PCP法、高壓超聲處理法及DMSO法的介紹

發(fā)布時間: 2022-09-09  點(diǎn)擊次數(shù): 973次

一、苯酚╱氯仿╱石油醚法PCP


LPS分子鑲嵌于胞壁的外膜中,用某些化學(xué)試劑將胞壁裂解(如酚)后,LPS分子從破潰的胞壁中游離出來。由于LPS是一種兩性分子,故它們在不同溶劑中的溶解度,*取決于該分子上的親水/疏水性基團(tuán)多少。S-LPS有完整的親水性О特異性側(cè)鏈,所以SLPS屬親水性分子。而RLPS,缺乏O特異性側(cè)鏈,含有完整或不完整的核心多糖和完整的類脂A,親水度不大,而易溶于有機(jī)溶劑中,故而R-LPS用酚水法提取時所得的產(chǎn)量極低。


PCP法是以90%苯酚、氯仿及石油醚406025:8所組成的單相混合提取液,這一提取方法只能將LPS及與之緊密結(jié)合的透道蛋白Porin提取出來,而其它成分則排除在提取液外。PCP法的水沉淀步驟僅能使LPS發(fā)生沉淀,而透道蛋白仍溶于苯酚中,故而PCP法所提取的LPS是一種較為純化的制劑。


PCP法對制取R型細(xì)胞的LPS產(chǎn)量十分滿意,且無核酸污染,蛋白質(zhì)含量也僅在0.11 %間,該法溫和,在室溫520℃即可完成,制取周期較短,適用于從RaRe的細(xì)菌,可成功地提取R-LPS,產(chǎn)量也相當(dāng)高。故PCP法是研究R-LPS的有用方法。應(yīng)必須注意的是在PCP法中,每一步操作均不應(yīng)使用鹽類,如MgCl2、CaCl2,否則會嚴(yán)重影響產(chǎn)量。



二、高壓超聲處理法


以某些物理方法(如超聲波處理菌體細(xì)胞使其*破裂,可增加繼后提取方法的*性,從而可使LPS的產(chǎn)率增加。Richard1983研制了一種既可提取光滑型又可提取粗糙LPS的新方法。該方法采用了高壓處理15000Ib/in2細(xì)菌的方法,粉碎菌細(xì)胞,繼又用超聲波處理,促進(jìn)碎片*裂解,再以DNa s e,RNa s e處理,消化核酸。再加入蛋白酶去消化蛋白質(zhì),離心12000xg,濃縮干燥。如此制得的LPS,產(chǎn)量為菌體的5181%(按測脂肪酸、糖和KDO),蛋白質(zhì)為0.1%、核酸1 %、25%,純度較高,產(chǎn)量比酚水法高7倍,比PCP法高2倍。


所得LPS經(jīng)各種免疫化學(xué)分析,均提示用此方法提取的LPS其抗原結(jié)構(gòu)完整。其不足之處是堿性條件上的加熱,以前認(rèn)為這一處理在于除掉蛋白質(zhì),特別是對于有些細(xì)菌如綠膿桿菌有用,但對別的細(xì)菌恐屬多余。應(yīng)當(dāng)指出的一點(diǎn)是,堿性加熱條件使類脂體A上的脂肪酸酯降解。另外個不足之處是,此方法較為復(fù)雜,不易被一般實(shí)驗(yàn)室采用。


三、DMSO


Adams介紹了一種較為簡單的LPS提取方法。該法應(yīng)用二甲亞Dimethyl SulfoxideDMSO作為主要提取試劑。以胞壁原料提制LPS。主要步驟為將預(yù)先制取的干燥胞壁以60DMSO提取水洗,酸化丙酮處理,冷凍干燥。DMSO法提取的LPS產(chǎn)量是酚水法的10倍,但蛋白質(zhì)含量很高45%) 。


  • 聯(lián)系電話電話400-687-1881
  • 傳真傳真010-87875015
  • 郵箱郵箱f.he@bio-life.com
  • 地址公司地址北京市大興區(qū)中關(guān)村科技園區(qū)大興生物醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)基地華佗路50號院18幢樓2層
  • 公眾號二維碼
© 2024 版權(quán)所有:科德角國際生物醫(yī)學(xué)科技(北京)有限公司(www.a4924.cn)   備案號:京ICP備2021012680號-1   網(wǎng)站地圖   技術(shù)支持:化工儀器網(wǎng)       

聯(lián)


呼和浩特市| 潮州市| 株洲市| 两当县| 格尔木市| 土默特左旗| 梅河口市| 永嘉县| 兴仁县| 常州市| 永城市| 阜宁县| 阳东县| 合肥市| 泽库县| 丘北县| 吉林市| 东乌珠穆沁旗| 大港区| 武陟县| 巫溪县| 夏河县| 镇原县| 青川县| 琼中| 张掖市| 宁城县| 元江| 资兴市| 漳州市| 崇阳县| 沁阳市| 长岛县| 德令哈市| 乳山市| 本溪市| 韶关市| 科尔| 岢岚县| 临西县| 高平市|